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ELISA实验方法之捕获包被法检测抗体


发布日期:[2019-07-16] 共阅[296]次

    前面给大家介绍的ELISA实验几大常见方法,不知道您掌握多少了呢?如果没有掌握那也没有关系,可以去浏览之前发布的文章哦!我司提供技术在线指导,如您有技术问题,也可前来咨询我司技术人员!今天是常见方法的zui后一篇了,主要解析的是捕获包被法检测抗体和捕获包被法检测抗体,具体内容请往下看!

    捕获包被法检测抗体

    捕获包被法(亦称反向间接法)ELISA,主要用于血清中某种抗体亚型成分(如IgM)的测定。以目前最常用的IgM测定为例,因血清中针对某种抗原的特异性IgM和IgG同时存在,则后者可干扰IgM的测定。因此先将所有血清IgM(包括异性IgM和非特异性IgM)固定在固相上,在去除IgG后再测定特异性IgM。IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。先用抗人IgM抗体包被固相,以捕获血清标本中的IgM(其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM)。然后加入抗原,此抗原仅与特异性IgM相结合。继而加酶标记针对抗原的特异性抗体。再与底物作用,呈色即与标本中的IgM成正相关。此法常用于病毒性感染的早期诊断。类风湿因子(RF)同样能干扰捕获包被法测定IgM抗体,导致假阳性反应。因此中和IgG的间接法近来颇受青睐,用这类试剂检测抗CMV IgGM和抗弓形虫IgM抗体已获成功。

    捕获法测抗体的简要操作步骤:
    1)特异性捕获抗体的包被,先把能特异性结合待测抗原的抗体固定于固相载体表面;
    2)加入待测样品,通过固定在载体表面的针对该抗原的抗体固定于载体表面;
    3)加入特异性抗原以及针对该特异性抗原的酶标抗体;
    4)加入酶促反应底物,发生显色反应,显色的深浅与待测抗体的量成正比。

    捕获包被法检测抗体

    近年在亲和素-生物素系统上又发展出ABS-ELISA法 。亲和素是一种糖蛋白,每个分子由4个能和生物素结合的亚基组成,生物素为小分子化合物。用化学方法制成的衍生物素-羟基琥珀酰亚胺酯可与抗体或酶形成生物素标记产物,标记方法颇为简便,并且不影响抗体或酶原有的生物学活性。亲和素生物素系统,简称ABS(avidin-biotin system)。由于亲和素与生物素间的亲和力极强,结合迅速,且极其稳定,使BAS标记技术比常规酶联免疫、放射免疫及荧光免疫技术有着更高的灵敏度,为微量抗原、抗体的检测开辟了新的途径,大大提高了检测的灵敏度,但该方法比普通ELISA多用了两种试剂,增加了操作步骤,因此在临床检验中ABS-ELISA应用不多。ABS-ELISA法可分为酶标记亲和素-生物素(LAB)法和桥联亲和素-生物素(ABC)法两种类型。两者均以生物素标记的抗体(或抗原)代替原ELISA系统中的酶标抗体(抗原)。

    在LAB法中,将特异性抗体生物素化、酶分子标记在亲和素分子上,生物素化抗体与被检抗原结合后,再借BAS的高度亲和力将酶分子联结到抗原分子上,经酶促反应即可检出抗原,因此提高检测的敏感度。

    ABC法同样将特异性抗体生物素化、酶分子标在生物素上,亲和素和酶标生物素需要先按一定比例形成ABC复合物,这种网络结构结合了大量的酶分子,当亲和素尚未被酶标生物素饱和时,生物素化抗体即可与之结合, 使被检抗原、生物素化抗体和酶标生物素联成一体。

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