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ELISA实验方法之竞争法检测抗原及...


发布日期:[2019-06-27] 共阅[82]次

    上次给大家介绍的双抗体夹心法不知道大家还有印象吗?如果已经忘记了,哈哈没有关系,可以翻阅下我们的上一篇文章哦,今天给大家介绍的是另外的两种方法哦,请看!

    竞争法检测抗原

    当小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的抗体结合位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式。经洗涤后分成两组:一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液,而另一组只加酶标记抗原,再经孵育洗涤后加底物显色,这两组底物降解量之差,即为所要测定的未知抗原的量。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。

    竞争法的简要操作步骤:

    1)先加入抗体,使抗体固定结合于载体表面;

    2)加入梯度浓度比例的待测样品与酶标抗原混合物,同时做只加酶标抗原的对照组;

    3)加入酶促反应底物,发生显色反应,对比实验组及对照组的显色差异,计算未知抗原的量。

    双抗原夹心法检测抗体

    双抗原夹心法的反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备,应根据抗原结构的不同,寻找合适的标记方法。

    双抗原夹心法的简要操作步骤为:

    1)先加入抗原,使抗体固定结合于载体表面;

    2)再加样品,使目标检测抗体形成抗原-抗体复合物;

    3)加酶标抗原;

    4)加入酶促反应底物,发生显色反应,显色的深浅与待测抗体的量成正比。

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