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ELISA实验方法之双抗体夹心法


发布日期:[2019-06-25] 共阅[357]次

    双抗体夹心法是检测抗原zui常用的方法,但要注意的是在一步法(待测抗原与酶标抗体一起加入反应)测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成“夹心复合物”出现钩状效应,甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)时,应注意可测范围的zui高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。

    双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子(RF)的干扰。RF是一种自身抗体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗体和酶标抗体结合,表现出假阳性反应。

    双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。

    双抗体夹心法的简要操作步骤为:

    1)先加入抗体,使抗体固定结合于载体表面;

    2)再加样品,使目标检测抗原形成抗原-抗体复合物;

    3)加酶标抗抗体(第二种动物抗抗原的酶标抗体);

    4)加入酶促反应底物,发生显色反应,显色的深浅与待测抗原的量成正比。

    今天更新检测方法为双抗体夹心法,想了解其他方法,可持续关注我司guan网哦,我们会不定期为您更新,下次更新的检测方法为竞争法检测抗原、双抗原夹心法检测抗体、间接法检测抗体、竞争法检测抗体等,尽请期待!

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