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WB实验结果“膜上一片空白”怎么回事?


发布日期:[2019-04-02] 共阅[234]次

    劲马专注科研试剂盒的研发及销售多年,涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学的各个领域,满足您实验所需,以实现与客户的双赢,完善的库存及供应体系以及高效稳定的专业技术,保证产品均能现货供应。期待您前来咨询选购。今天小编给大家带来的是:WB实验结果“膜上一片空白”,什么原因导致的呢?一起来看看吧!

    一、胶和膜放反了:如果在转印的过程中,胶和膜的位置颠倒了,那么蛋白就从胶上转移到缓冲液中,而不会到达膜上。对于标准的转印,凝胶应靠近三明治的负极,而膜对应正极。

    二、转膜效率低:转膜效率受多种因素影响,包括蛋白的大小、凝胶中丙烯酰胺的百分比、电场强度、转印时间和缓冲液的PH值。一般来说,蛋白越大,转移的越慢。转移大蛋白zui好的方法是用高的电场强度。而小蛋白长时间处于高电场强度下可能会传出转印膜。避免这个问题的方法是用0.2μm孔径的PVDF膜进行转印。如果蛋白的等电点接近缓冲液的pH值,那么这个蛋白携带的电荷很少,在电场中页几乎不移动。如果你的目的蛋白是强碱性的,那么你可以用碳酸盐(pH9.9)、CAPS(pH11)及酸性缓冲液。

    三、试剂放置太久或存放条件不正确:抗体会慢慢降解,如果反复冻融的话,它会快速降解。底物应储存在-20℃。

    四、抗体不纯或滴度太低:一抗的浓度差异很大,应该根据经验来决定一抗的稀释度。一般的原则是以1:100-1:1000来稀释血清或组织培养上清,以1:1000-1:10000来稀释腹水或超免疫动物的血清。Bio-Rad的印迹级别的二抗稀释度是1:3000。

    五、酶失活了:叠氮钠是辣根过氧化物酶的抑制剂。不要再HRP显色的western blot中使用任何含叠氮钠的试剂。叠氮钠可以用于碱性磷酸酶结合的抗体中,而无副作用。另外,只能使用蒸馏的去离子水。

    六、使用Tween-20洗涤:Tween-20(吐温-20)可能会干扰某些抗体-抗体相互作用,或洗去PVDF膜上的目的蛋白。因此除了封闭之后的第一次洗涤,其他洗涤过程中都不使用Tween-20。

    七、检测系统缺乏足够的灵敏度:确保蛋白的上样量在检测系统的灵敏度范围内。

    劲马成为国内生命科学领域ELISA试剂盒的主要供应商之一,代理许多国际先进水平的高科技试剂盒,包括分子生物学、细胞生物学、免疫学等多个研究及应用领域,期待能与更多科研单位深入合作,共同打造生物行业一片蓝天。

 

主营:ELISA检测试剂盒;免疫组化试剂盒,胎牛血清;酶联免疫试剂盒,进口抗体,生物试剂 公司地址:上海市闵行区莘庄工业园区金都路3688号E幢101-106室 邮政编码:201100 
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